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RA患者microRNA-155调节免疫细胞分化的机制研究 杨瑞宾 国学红 周成英 吴雪梅 贵州医药 论著 2023年05期 465 0
口腔鳞状细胞癌耐药相关信号通路的研究进展 周志超 张立刚 胡小华 贵州医药 综述 2022年05期 454 0
整合素连接激酶基因敲除骨肉瘤细胞系的建立及其对上皮-间质转化的影响 赖永洁 由万宁 金炼驰 金明哲 贵州医药 论著 2023年03期 435 0
探究线粒体自噬在心血管疾病的作用研究进展 王洋 中国保健营养 调查研究 2021年12期 792 0
摘要:目的 探讨类风湿性关节炎(RA)患者miR-155如何调节CD4+T细胞亚群Th17及Treg细胞的分化及其特异性转录因子和细胞因子的表达,了解miR-155主要作用的靶基因及其调节的JAK-SATA信号通路在RA中的致病机制。方法 采集62例RA患者(包括37例轻度类风湿关节炎患者与25例重度类风湿关节炎患者)及30例健康对照组外周血提取RNA,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法检测各组研究对象外周血miR-155、SOCS1、JAK3、RORγt、SATA3、SATA5、Foxp3等基因的mRNA表达情况;采用免疫印迹分析(Western boltting)检测SOCS1、JAK3、RORγt、SATA3/5、Foxp3靶基因及相关信号通路中重要蛋白的表达情况;采用免疫荧光法分别检测各组研究对象血清中IL-2、IL-6、IL-17、IL-10等细胞因子的表达情况。采用电化学发光法、免疫散射比浊法及胶乳增强免疫比浊法分别检测各组研究对象血清中A-CCP、CRP、ASO与RF含量。结果 RA患者外周血中miR-155 mRNA、JAK3mRNA、SATA3mRNA、RORγt mRNA及其蛋白表达水平明显高于健康对照组(P<0.05),且与疾病严重程度相关;而SOCS1mRNA、SATA5mRNA、Foxp3 mRNA及其蛋白表达水平明显低于健康对照组,且与疾病严重程度相关(P<0.05);RA患者IL-2、IL-6、IL-10、IL-17水平明显高于健康对照组(P<0.05)且与疾病严重程度相关;RA患者血清中A-CCP、RF含量显著高于健康对照组(P<0.05),且与疾病严重程度相关。结论 RA患者外周血miR-155表达明显升高,在CD4+T细胞分化过程中,miR-155可能通过抑制SOCS1的表达而上调JAK/STAT信号通路中SATA3/RORrt通路分子以促进Th17细胞的分化及其细胞因子IL-6、IL-17的表达;可能通过下调JAK/STAT信号通路中SATA5/Foxp3通路分子以抑制Treg细胞的分化及分泌。
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摘要:目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建人整合素连接激酶ILK基因敲除的人骨肉瘤U2OS细胞系,探讨ILK敲除对骨肉瘤细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法 首先在人ILK基因的第2,4,6外显子区域选取序列,分别设计3组靶向ILK的sgRNA,退火后与酶切lentiCRISPRv2慢病毒质粒连接,构建含有sgRNA的重组质粒,重组载体与病毒包装质粒共转染293T细胞后获得慢病毒颗粒;将病毒颗粒感染U2OS细胞,经嘌呤霉素筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,通过测序、qRT-PCR及Western blot鉴定ILK基因稳定敲除细胞系,并进一步通过Western blot检测E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、Snail1、Snail2、Twist等EMT相关标记分子以及Akt的磷酸化水平。结果 构建了3组lentiCRISPRv2-ILK-sgRNA敲除质粒,经慢病毒感染U2OS细胞后及单细胞克隆株的筛选鉴定后得到了一株含有ILK等位基因突变的细胞,Western blot证实ILK-/-细胞中ILK蛋白表达缺失;相比野生型,ILK-/-细胞中N-钙黏蛋白、Snail1、Snail2及Twist蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而E-钙黏蛋白表达则显著升高(P<0.05);与野生型细胞相比,ILK-/-细胞Akt通路的磷酸化水平显著降低(P<0.05),而经TGF-β1处理后,相比野生型细胞,ILK-/-细胞中Akt激活水平亦显著下降(P<0.01)。结论 成功构建ILK-/-U2OS细胞系,敲除ILK可能通过下调Akt信号通路抑制U2OS细胞的EMT进程。
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